丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达

陈立冬; 成军; 洪源; 张连峰; 韩莉; 郭江

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达

1. 北京地坛医院传染病研究所
2. 郑州大学第一医院消化内科

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中图分类号: R512.63
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Construction of the prokaryotic expression vector of NS5ATP4A gene and its expression

摘要

摘要: 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体（NS5ATP4A）的原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增NS5ATP4A基因,克隆入pET32a（+）质粒,构建pET32a（+）-NS5ATP4A表达重组体,转化DH5α和BL21菌,经IPTG诱导。SDS-PAGE分析,Western Blot验证蛋白带。结果成功构建大肠杆菌原核表达载体。经IPTG诱导,得到了目的蛋白分子量为35kD,用Western Blot证实其具有良好的抗原性。结论构建原核表达载体pET32a（+）-NS5ATP4A,为抗原的制备及临床检测奠定了基础。
- 病毒非结构蛋白质类 /
- 基因表达 /
- 肝炎病毒 /
- 肝炎,丙型
Abstract: Objective To construct prokaryotic expression vector of NS5ATP4A gene and express it in E.coli.Methods The NS5ATP4A gene was amplified by PCR and cloned in to plasmid pET32a (+) to construct recombinant prokaryotic expression vector pET32a (+) -NS5ATP4A.After transfection into the E.coli and induction with IPTG, recombinant target protein was analyzed by SDS-PAGE and approved by Western Blot.Results The recombinant prokaryotic expression vector was constructed successfully.The antigenicity of 35KD target protein, induced by IPTG was proved by Western Blot.Conclusion The construction of prokaryotic expression vector pET32a (+) -NS5ATP4A provides the foundation for the preparation of antibody in clinical test.
- viral nonstructural proteins /
- gene expression /
- hepatitis viruses /
- hepatitis C

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参考文献(16)

[1]刘妍, 段惠娟, 成军, 等.丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活SV40病毒启动子的研究[J].军医进修学院学报, 2003, 24 (2) ∶81-83.

[2]成军.丙型肝炎病毒基因的干扰素敏感决定区[J].国外医学:流行病学.传染病学分册, 2000, 27 (2) ∶52-58.

[3]Petri TU, Nobuko K, Zhou DM, et al.Selection of RNA aptamersthat bind specifically to the 3NS protease of hepatitis C virus[J].Eur J Bio chem, 1997, 248 (1) ∶130-138.

[4]成军, 杨守纯.现代肝炎病毒分子生物学[M].北京:人民军医出版社, 1997∶137.

[5]Sato C.Effects of hepatitis C virus proteins on the interferon stimula-ted signal transduction[J].Nippon Rinsho, 2001, 59 (7) ∶1271.

[6]刘妍, 成军.丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活质基因的克隆化研究[J].解放军医学杂志, 2003, 28 (1) ∶40-43.

[7]杨倩, 刘妍, 成军, 等.丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因4的克隆化研究[J].胃肠病学和肝病学杂志, 2003, 12, (3) ∶248-250.

[8]成军.慢性病毒性肝炎发病机制的分子生物学研究[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (2) ∶125-128.

[9]李克, 王琳, 成军, 等.丙型肝炎病毒蛋白结合蛋白[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (2) ∶215-217.

[10]成军.丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白的研究进展[J].国外医学病毒学分册, 2000, 7 (4) ∶123-127.

[11]成军.丙型肝炎病毒感染慢性化的分子生物学机制[J].国外医学病毒学分册, 2000, 7 (1) ∶29-32.

[12]李克, 王琳, 成军, 等.酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1[J].世界华人消化杂志, 2001, 9 (12) ∶1379-1383.

[13]成军, 李克, 陆荫英, 等.丙型肝炎病毒调节基因结合蛋白的研究[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (2) ∶223-225.

[14]李克, 王琳, 成军, 等.丙型肝炎病毒NS2基因酵母双杂交饵载体构建及表达[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (2) ∶129-132.

[15]王琳, 李克, 成军, 等.筛选与克隆肝再生增强因子结合蛋白的基因[J].世界华人消化杂志, 2002, 10 (2) ∶161-164.

[16]Wartz JR.Advances in Escherichia coli Production of TherapeuticProteins[J].Current opinion in biotechnology, 2001, 12 (2) ∶195-201.

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