乙型肝炎肝硬化患者门静脉高压改善的组织学因素分析

李盟; 郭亚楠; 黄恺; 孙鑫; 李正鑫; 赵志敏; 吕靖; 刘成海

doi:10.12449/JCH250815

乙型肝炎肝硬化患者门静脉高压改善的组织学因素分析

DOI: 10.12449/JCH250815

李盟¹,
郭亚楠¹,
黄恺^{1, 2},
孙鑫^{1, 2},
李正鑫³,
赵志敏^{1, 2},
吕靖^{1, 2},
刘成海^{1, 2, , ,}

1.
上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所，上海 201203
2.
上海市中医临床重点实验室与肝肾疾病病证教育部重点实验室，上海 201203
3.
上海市浦东新区公利医院中医科，上海 200135

基金项目:

“十二五”国家科技重大专项 (2014ZX10005001);

国家自然科学基金 (82274305);

国家自然科学基金 (82305200);

上海市临床重点专科建设项目 (shslczdzk01201);

上海市中医药研究院科技发展项目 (24YJS03)

伦理学声明： 本研究方案于2014年7月3日经由曙光医院及其他参与医院伦理委员会审批，批号：2014-331-27-01，所纳入患者均签署知情同意书。

利益冲突声明：本文不存在任何利益冲突。

作者贡献声明：刘成海负责课题设计；李盟、郭亚楠、黄凯、孙鑫负责资料收集与分析，李盟撰写论文；李正鑫，赵志敏参与结果讨论；吕靖、刘成海指导撰写文章并最后定稿。

详细信息

通信作者:
刘成海， chenghailiu@hotmail.com （ORCID： 0000-0002-1696-6008）

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出版历程
- 收稿日期: 2025-01-15
- 录用日期: 2025-02-13
- 出版日期: 2025-08-25

Histological factors for improving portal hypertension in patients with chronic hepatitis B cirrhosis

Meng LI¹,
Yanan GUO¹,
Kai HUANG^{1, 2},
Xin SUN^{1, 2},
Zhengxin LI³,
Zhimin ZHAO^{1, 2},
Jing LYU^{1, 2},
Chenghai LIU^{1, 2
, ,
,}

1.
Institute of Liver Diseases，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China
2.
Shanghai Key Laboratory of Traditional Chinese Clinical Medicine，Key Laboratory of Liver and Kidney Diseases，Ministry of Education，Shanghai 201203，China
3.
Department of Traditional Chinese Medicine，Shanghai Pudong New Area Gongli Hospital，Shanghai 200135，China

Research funding:

National Science and Technology Major Project (2014ZX10005001);

National Natural Science Foundation of China (82274305);

National Natural Science Foundation of China (82305200);

Shanghai Key Specialty of Traditional Chinese Clinical Medicine (shslczdzk01201);

Science and technology development project of Shanghai Academy of Traditional Chinese Medicine (24YJS03)

More Information

Corresponding author: LIU Chenghai， chenghailiu@hotmail.com （ORCID： 0000-0002-1696-6008）

摘要

摘要: 目的通过观察肝硬化门静脉高压（PH）患者治疗前后的肝组织学变化，发现影响PH好转的组织学及细胞学基础，为临床药物研发提供依据。方法选取2014年9月—2018年10月在12个省20家医院招募的完成48周抗病毒或联合抗肝纤维化治疗的乙型肝炎肝硬化患者322例，使用Baveno Ⅶ中临床显著门静脉高压（CSPH）无创诊断标准评价PH水平，根据治疗前肝硬度值≥25 kPa筛选出43例确诊CSPH的患者，以治疗后PH水平下降是否≥2个等级分为PH改善组（n=19）及PH未改善组（n=24）。收集人口学、实验室检查资料，并进行肝纤维化评价（HE染色及网状纤维染色）和肝组织微血管病变评价［包括闭塞性门静脉病变（OPV）、结节性再生性增生（NRH）及不完全间隔纤维化（ISF）］。免疫组化检测血管性血友病因子（vWF）、纤维连接蛋白（Fibronectin）的表达水平；多重荧光免疫组化检测纤维蛋白原（Fibrinogen）、CD32b、CD31、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。计量资料的两组间比较使用成组t检验或Mann-Whitney U检验，计数资料的两组间比较使用χ²检验。结果经过48周治疗，RBC、ALT、AST、APRI评分、肝纤维化等级与PH等级发生好转（P值均<0.05），其中19例患者PH等级下降≥2个等级，为PH改善组，其余为PH未改善组。两组患者间肝纤维化结局并无统计学差异（χ²=3.380，P=0.066）。微血管病变评价发现，治疗后PH改善组OPV程度、vWF表达水平及Fibronectin表达量显著低于PH未改善组（P值均<0.05），而NRH程度、ISF程度及Fibrinogen表达量无统计学差异（P值均>0.05）。细胞学评价发现，治疗前及治疗后两组间CD32b、CD31、α-SMA表达量无统计学意义（P值均>0.05），而治疗前后差值比较显示PH改善组CD32b表达量显著增加（t=-2.007，P=0.045），而α-SMA表达量显著减少（t=2.628，P=0.013）。结论 PH改善的病理特征与肝纤维化逆转和肝微血管改善有关，其细胞学基础与肝窦内皮细胞去分化及肝星状细胞活化表型有关。
- 乙型肝炎 /
- 肝硬化 /
- 高血压，门静脉 /
- 组织学 /
- 微血管
Abstract: Objective To investigate the histological and cellular bases for the improvement of portal hypertension （PH） by observing liver histopathological changes after treatment in patients with cirrhotic portal hypertension， and to provide a basis for clinical drug development. Methods A total of 322 patients with hepatitis B cirrhosis who completed 48 weeks of antiviral therapy or combined anti-fibrotic treatment in 20 hospitals across 12 provinces in China from September 2014 to October 2018 were enrolled， and the noninvasive diagnostic criteria for clinically significant portal hypertension （CSPH） from Baveno Ⅶ were used to assess the severity of PH； 43 patients with a confirmed diagnosis of CSPH were identified based on liver stiffness measurement （LSM） ≥25 kPa before treatment， and according to whether the severity of PH was reduced by ≥2 grades after treatment， the patients were divided into PH improvement （n=19） group and PH non-improvement group（n=24）. Related data were collected， including demographic data， laboratory tests. Liver fibrosis were assessed， including HE staining and reticular fiber staining； liver microvascular lesions were assessed， including obliterative portal venopathy （OPV）， nodular regenerative hyperplasia （NRH）， and incomplete septal fibrosis （ISF）. Single immunohistochemical staining was performed for von Willebrand factor （vWF）， and fibronectin； multiplex immunohistochemical staining was performed for fibrinogen， CD32b， CD31， alpha-smooth muscle actin （α-SMA）. The independent-samples t test or the Mann-Whitney U test was used for comparison of continuous data between two groups， and the chi-square test was used for comparison of categorical data between two groups. Results After 48 weeks of treatment， 43 patients had significant improvements in red blood cell count， alanine aminotransferase， aspartate aminotransferase， aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index score， liver fibrosis grade， and PH grade （all P<0.05）， among whom 19 patients showed a reduction in PH severity by ≥2 grades （PH improvement group）， while the remaining patients were enrolled as the PH non-improvement group. There was no significant difference in the outcome of liver fibrosis between the two groups （χ²=3.380， P=0.066）. Microvascular lesion assessment showed that compared with the PH non-improvement group， the PH improvement group had significantly lower OPV severity， microvascular density （the expression level of vWF）， and expression of fibronectin （all P<0.05）， while there were no significant differences in NRH severity， ISF severity， and the expression level of fibrinogen between the two groups （all P>0.05）. Cytological evaluation showed no significant differences in the expression levels of CD32b， CD31， and α-SMA between the two groups before and after treatment （all P>0.05）， and comparison of the expression levels before and after treatment showed that the PH improvement group had a significant increase in the expression level of CD32b （t=-2.007， P=0.045） and a significant reduction in the expression level of α-SMA （t=2.628， P=0.013）. Conclusion The pathological features of PH improvement are associated with liver fibrosis regression and the improvement in liver microvascular lesions， and at the cellular level， PH improvement is associated with the dedifferentiation of liver sinusoidal endothelial cells and the activated phenotype of hepatic stellate cells.
- Hepatitis B /
- Liver Cirrhosis /
- Hypertension， Portal /
- Histology /
- Microvessels

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注： a，OPV半定量比较；b，OPV典型表现，红色曲线范围为闭塞的门静脉（网状纤维染色，×100）；c，vWF、Fibronectin免疫组化染色及Fibrinogen的mIHC染色（×100）；d，MVD半定量比较；e，Fibronectin阳性面积比较；f，Fibrinogen阳性面积比较。

图 1 两组患者肝脏微血管病变直接表现比较

Figure 1. Comparison of direct manifestations of hepatic microangiopathy in two groups

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注： a，NRH半定量比较；b，NRH典型表现，红色曲线范围即为再生结节（HE染色，×100）；c，ISF半定量比较；d，ISF典型表现为红色箭头所示（HE染色，×100）。

图 2 两组患者肝脏微血管病变间接表现比较

Figure 2. Comparison of indirect manifestations of hepatic microangiopathy in two groups

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注： a，两组患者治疗前后肝组织病理染色（×100）；b、c、d分别为两组患者0周、48周、48周与0周差值CD31、CD32b、α-SMA阳性细胞占比比较。

图 3 两组患者治疗前后LSEC与HSC变化比较

Figure 3. Comparison of LSEC and HSC changes pre- and post-treatment in two groups

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表 1 Baveno Ⅶ共识的无创诊断CSPH标准

Table 1. Baveno Ⅶ criteria for noninvasive diagnosis of CSPH

PH等级	1	2	3	4	4	5
LSM（kPa）	<5	<10	≥10～15	≥15～20	≥20～25	≥25
PLT（×10⁹/L）	任何	任何	≥150	<110	<150	任何

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表 2 肝组织微血管病变评价标准

Table 2. Criteria for evaluating microangiopathy in liver tissue

评分	OPV	NRH	ISF
0分	0	0	0
0.5分	<25%	<25%	<25%
1.0分	25%～<50%	25%～<50%	25%～<50%
1.5分	50%～<75%	50%～<75%	50%～<75%
2.0分	≥75%	≥75%	≥75%
注：%代表病变范围累及总汇管区数量的百分比。

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表 3 43例患者治疗前后临床资料比较

Table 3. Comparison of clinical data for all patients before and after treatment

项目	0周	48周	统计值	P值
RBC（×10¹²/L）	4.50±0.55	4.82±0.47	t=-2.828	0.006
Hb（g/L）	141.54±18.19	146.64±18.10	t=-1.302	0.197
WBC（×10⁹/L）	4.68±1.41	4.96±1.26	t=-1.001	0.320
PLT（×10⁹/L）	99.00（65.00～121.00）	111.00（65.00～131.00）	Z=-1.607	0.054
ALT（U/L）	52.00（30.00～73.40）	37.00（28.00～57.00）	Z=-1.862	0.031
AST（U/L）	47.00（33.00～67.00）	37.00（29.00～47.00）	Z=-2.540	0.011
TBil（μmol/L）	14.90（11.60～21.40）	16.30（12.50～21.60）	Z=-0.428	0.672
Alb（g/L）	41.34±6.15	40.93±6.12	t=-0.310	0.757
PT（s）	13.95±1.64	13.43±1.46	t=1.324	0.189
Cr（mmol/L）	70.33±15.68	71.02±16.17	t=-0.203	0.840
LSM（kPa）	27.30（25.60～35.30）	15.70（11.10～18.90）	Z=-7.368	<0.001
FIB-4评分（分）	3.70（2.65～5.87）	2.56（1.84～3.75）	Z=-1.689	0.092
APRI评分（分）	1.31（0.90～2.01）	1.00（0.64～1.36）	Z=-2.669	0.007
Ishak评分［例（%）］			χ²=-2.969	0.003
6分	18（41.67）	12（27.91）
5分	25（58.33）	16（37.21）
4分	0（0.00）	10（23.26）
3分	0（0.00）	4（9.30）
2分	0（0.00）	1（2.33）
PH等级［例（%）］			χ²=-6.270	<0.001
5	43（100.00）	15（34.88）
4	0（0.00）	9（20.93）
3	0（0.00）	14（32.56）
2	0（0.00）	5（11.63）
1	0（0.00）	0（0.00）
注：PT，凝血酶原时间；Cr，肌酐。

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表 4 两组患者基线临床资料比较

Table 4. Comparison of baseline clinical data between the two groups

项目	PH未改善组（n=24）	PH改善组（n=19）	统计值	P值
年龄（岁）	44.78±9.67	42.88±8.62	t=0.687	0.496
男/女（例）	23/1	12/7	χ²=7.477	0.006
BMI（kg/m²）	24.48±2.6	24.87±3.03	t=-0.451	0.654
RBC（×10¹²/L）	4.54±0.45	4.47±0.47	t=0.406	0.687
Hb（g/L）	145.77±12.39	136.21±22.85	t=1.642	0.113
WBC（×10⁹/L）	4.68±1.47	4.67±1.37	t=0.035	0.972
PLT（×10⁹/L）	88.25±29.35	101.84±31.13	t=-1.468	0.150
ALT（U/L）	55.00（31.25～84.00）	44.00（26.00～58.00）	Z=-1.725	0.084
AST（U/L）	55.33±25.66	46.46±17.50	t=1.267	0.212
TBil（μmol/L）	19.38（12.28～22.75）	13.10（10.20～16.90）	Z=-2.055	0.040
Alb（g/L）	41.68±6.29	40.93±6.12	t=0.392	0.697
PT（s）	14.36±1.69	13.43±1.46	t=1.893	0.065
Cr（mmol/L）	75.25±14.31	64.11±15.47	t=2.448	0.019
FIB-4评分（分）	3.70（2.65～5.87）	3.23（1.71～4.85）	Z=-1.052	0.293
APRI评分（分）	1.73±0.90	1.31±0.76	t=1.627	0.111
Ishak评分			χ²=-0.052	0.977
6分	10（41.67）	8（42.11）
5分	14（58.33）	11（57.89）

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