PDF下载 ( 1759 KB)
基于烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）探讨红景天苷在非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的保护作用
DOI: 10.12449/JCH240112
Role of salidroside in a mouse model of non-alcoholic fatty liver disease： A study based on nicotinamide phosphoribosyltransferase
-
摘要:
目的 研究红景天苷对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的保护作用，并探讨其作用机制。 方法 将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、高脂饮食（HFD）组、HFD+空白对照组、HFD+红景天苷组，每组6只，正常组小鼠予以普通饲料喂养，其余各组高脂饮食，造模14周开始给予100 mg·kg-1·d-1红景天苷灌胃给药，22周末取材。酶联免疫法测定血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C等相关生化指标；HE染色和NAFLD活动评分（NAS）观察小鼠肝组织病理。Western Blot检测肝组织内烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、Sirt1、AMPKα、SREBP1的表达变化。多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果 与正常组比较，HFD组小鼠肝组织存在广泛较大的脂肪滴，脂肪变性明显，NAS评分升高（P<0.01），外周血AST、ALT、TG、TC、LDL-C的含量明显增高（P值均<0.05），HDL-C含量降低（P<0.05），肝组织内NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达降低（P值均<0.05），SERBP1的表达增加（P<0.01）。而HFD+红景天苷组较HFD组、HFD+空白对照组肝组织空泡状脂滴分布、小叶内炎症减少，肝细胞气球样变减轻，NAS评分下降（P<0.01），外周血AST、ALT、TG、LDL-C的含量明显降低（P值均<0.05），HDL-C含量升高（P<0.05），NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达增加（P值均<0.05），SERBP1的表达减少（P<0.01）。 结论 红景天苷能明显改善高脂饮食诱导小鼠NAFLD的病理状态，并通过增加NAMPT、Sirt1、AMPKα的表达，减少SERBP1的表达，发挥其对 NAFLD的保护作用。 -
关键词:
- 烟酰胺磷酸核糖基转移酶 /
- 红景天苷 /
- 非酒精性脂肪性肝病 /
- 小鼠
Abstract:Objective To investigate the protective effect of salidroside against nonalcoholic fatty liver disease （NAFLD） and its mechanism of action. Methods A total of 24 male KM mice were randomly divided into normal group， HFD group， HFD+blank control group， and HFD+salidroside group， with 6 mice in each group. The mice in the normal group were given normal diet， and those in the other groups were given high-fat diet. After 14 weeks of modeling， the mice were given salidroside 100 mg/kg/day by gavage， and related samples were collected at the end of week 22. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the serum levels of related biochemical parameters including alanine aminotransferase （ALT）， aspartate aminotransferase （AST）， triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C）， and low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）； HE staining and NAFLD activity score （NAS） were used to observe the liver histopathology of mice； Western blot was used to measure the changes in the expression of NAMPT， Sirt1， AMPKα， and SREBP1 in liver tissue. A one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups， and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups. Results Compared with the normal group， the HFD group had obvious steatosis and extensive large lipid droplets in liver tissue， with significant increases in NAS score （P<0.01） and the content of AST， ALT， TG， TC， and LDL-C in peripheral blood （all P<0.05） and a significant reduction in the content of HDL-C （P<0.05）， as well as significant reductions in the expression levels of NAMPT， AMPKα， and Sirt1 in liver tissue （all P<0.05） and a significant increase in the expression level of SERBP1 （P<0.01）. Compared with the HFD group and the HFD+blank control group， the HFD+salidroside group had reductions in the distribution of vacuolar lipid droplets and intralobular inflammation in liver tissue， alleviation of the ballooning degeneration of hepatocytes， significant reductions in NAS score （P<0.01） and the content of AST， ALT， TG， and LDL-C in peripheral blood （all P<0.05）， and a significant increase in the content of HDL-C （P<0.05）， as well as significant increases in the expression levels of NAMPT， AMPKα， and Sirt1 in liver tissue （all P<0.05） and a significant reduction in the expression level of SERBP1 （P<0.01）. Conclusion Salidroside can significantly improve the pathological state of mice with NAFLD induced by high-fat diet and exert a protective effect against NAFLD by increasing the expression of NAMPT， Sirt1， and AMPKα and reducing the expression of SERBP1. -
原发性肝癌发病居恶性肿瘤第4位，死亡率仅次于肺癌，居第2位，疾病负担沉重［1-2］。原发性肝癌中以肝细胞癌（HCC）最常见，占比75%～85%［3］。2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）是肝脏恶性肿瘤的独立危险因素，T2DM通过多种机制加速肝癌进展、影响治疗结局［4-5］。同时，T2DM是肝癌患者常见的合并症。
索拉非尼是一种口服多靶点、多激酶抑制剂，可使晚期HCC患者生存获益，是最早用于肝癌系统抗肿瘤治疗的分子靶向药物［6-7］。多纳非尼是通过氘修饰技术，将索拉非尼的吡啶酰甲胺结构改为吡啶酰三氘代甲胺，该位点涉及酰胺水解、氧化、去甲基和葡糖醛酸化等多个代谢过程，不仅影响药物活性，药代动力学特征也发生改变［8-9］。研究显示，索拉非尼和多纳非尼均可抑制尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A9（UDP-glucuronosyltransferase 1A9，UGT1A9）Ⅱ相代谢酶［10-11］，且体外研究证明索拉非尼是P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的抑制剂［12］。艾托格列净是钠-葡萄糖共转运蛋白2（sodium-glucose co-transporter 2，SGLT2）抑制剂类口服降糖药，其降糖疗效不依赖于β细胞功能，不易引发低血糖，且该类药物具有心血管保护及肾脏获益的优势［13-15］，在临床应用广泛。艾托格列净主要经UGT1A9和UGT2B4/2B7介导的O-葡糖醛酸化代谢，少量经细胞色素P450（CYP450）酶氧化代谢，且艾托格列净是P-gp和乳腺癌耐药蛋白转运体底物［16-17］。临床上索拉非尼或多纳非尼与艾托格列净可能联合用于治疗肝癌合并T2DM患者，但合用是否会发生基于药物代谢酶或转运体的药物相互作用，目前未见报道。因此，本研究拟在大鼠体内进行索拉非尼和多纳非尼对艾托格列净的药代动力学影响探究，旨在为临床合理用药提供参考。
1. 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 主要仪器
岛津LC-30A型超高效液相色谱仪（日本岛津公司）；AB Sciex Triple Quad 5500型串联三重四级杆质谱仪（包含Turbo VTM型电喷雾离子化源，美国AB公司）；AB204-S标准型分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ5200E超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）；VM-03U型涡旋混匀器（美国精骐公司）；Sorvall ST 16高速低温离心机（美国Thermo Fisher公司）。
1.1.2 药品与试剂
艾托格列净对照品（批号C15501208，纯度99%）、索拉非尼原料药（批号C15090388，纯度98%）购自上海麦克林生化科技股份有限公司；达格列净对照品（内标，批号F2209347，纯度≥99%）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲苯磺酸多纳非尼片（批号01221105）购自苏州泽璟生物制药股份有限公司；肝素钠注射液（批号F201231104）购自河北常山生化药业股份有限公司；二甲基亚砜（DMSO）购自北京索来宝科技有限公司；色谱级乙腈、甲酸、乙酸铵、甲基叔丁基醚购自赛默飞世尔科技有限公司；娃哈哈纯净水购自杭州娃哈哈集团有限公司。
1.2 实验动物
SPF级雄性SD大鼠24只，体质量230～250 g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物质量合格证号：110322231103572586，生产许可证号：SCXK（京）2019-0008，动物使用许可证号：SYXK（冀）2020-005。所有大鼠在标准环境中饲养，实验前12 h禁食，可自由饮水。
1.3 血浆样品测定方法
1.3.1 对照品溶液的配制
精密称取艾托格列净对照品适量，用DMSO溶液溶解，制成终质量浓度1 mg/mL的对照品储备液。用50%乙腈-水逐级稀释，配制成50、100、500、1 000、2 000、5 000、10 000、20 000 ng/mL的混合标准曲线工作溶液。同法制得低、中、高质控工作溶液，终浓度分别为150、8 000、15 000 ng/mL。
1.3.2 内标溶液的配制
精密称取达格列净1 mg溶解于1 mL DMSO中，配制成1 mg/mL的内标储备液，用50%乙腈-水稀释得到2 000 ng/mL的混合内标工作溶液。
1.3.3 色谱条件
以Boltimate ® EXT-C18（2.1×100 mm，2.7 μm）为色谱柱；以含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸铵溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～0.5 min，50%B；0.5～1 min，50%～90%B；1～2.5 min，90%B；2.5～3 min，90%～50%B；3～3.1 min，50%B）；流速为0.3 mL/min；进样量为6 μL。
1.3.4 质谱条件
离子化源为电喷雾离子源，采用正离子，多反应监测扫描；艾托格列净和内标达格列净定量分析离子对分别为m/z 437.4→207.0（去簇电压：130 V，碰撞能量：47 V）、m/z 426.2→167.1（去簇电压：80 V，碰撞能量：30 V），质谱图见图1。气帘气压力为20.0 psi、碰撞气体压力为8 kPa，源喷射电压为5 500 V；离子源温度为500 ℃；Gas1为50.0 psi，Gas为60 psi。
注： a，艾托格列净；b，达格列净（内标）。图 1 艾托格列净和内标达格列净的二级质谱图Figure 1. Product ion mass spectrun of ertugliflozin and internal standard dapagliflozin1.3.5 血浆样品的处理
取大鼠血浆样品50 μL，加入“1.3.2”项中的内标溶液5 μL和甲基叔丁基醚250 μL，涡旋混匀3 min，4 ℃条件下12 000 r/min离心10 min，取上清液200 μL，室温下氮气吹干，用100 μL 50%乙腈-水复溶，涡旋混合，待进样分析。
1.4 方法学验证
1.4.1 专属性
按照“1.3.5”项方法分别处理大鼠空白血浆、艾托格列净质量浓度为5 ng/mL的模拟血浆样品、大鼠灌胃艾托格列净（1.5 mg/kg）1 h的血浆样品，进样分析后记录色谱图，考察方法的专属性。
1.4.2 标准曲线和定量下限
精密量取8份45 μL大鼠空白血浆，分别加入“1.3.1”项系列对照品工作溶液5 μL，涡旋混匀，配制成艾托格列净质量浓度分别为5、10、50、100、200、500、1 000、2 000 ng/mL的校正标样，按“1.3.5”项方法操作后进样分析，记录峰面积。以艾托格列净的质量浓度为横坐标，艾托格列净与内标的峰面积比值为纵坐标，采用加权最小二乘法拟合回归曲线，定量下限为标准曲线的最低点。
1.4.3 精密度与准确度
按照“1.3.5”项要求配制艾托格列净的定量下限、低、中、高质控4个质量浓度分别为5、15、800、1 500 ng/mL的血浆样品，每个浓度平行6份。连续3天测定，分别用3条随行标准曲线回归方程计算艾托格列净实际质量浓度，考察日内、日间精密度采用相对标准偏差（relative standard deviation， RSD），准确度采用相对误差（relative error， RE）。质控样品和定量下限样品的RSD应分别<15%和<20%，RE应分别在±15%和±20%范围内。
1.4.4 基质效应与提取回收率
取6份不同来源的空白血浆配制15、800、1 500 ng/mL的低、中、高质控样品，按“1.3.5”项方法处理，每个质量浓度平行6份，进样分析记录分析物与内标的峰面积比值为A。另取空白血浆，不加内标，同法处理取上清液得到空白基质溶液后，加入内标溶液和低、中、高3个质控工作溶液，使其与质控样品质量浓度一致，进样分析后测得分析物与内标峰面积比值为B，艾托格列净质控纯溶液和内标峰面积比值为C。提取回收率（%）=A/B×100%，基质效应（%）=B/C×100%。
1.4.5 稳定性
按照“1.3.5”项下要求配制艾托格列净低、中、高3个质量浓度的质控样品，每个浓度平行6份，分别考察室温放置8 h、处理后样品在进样器放置12 h，-80 ℃冻存1个月、-80 ℃至室温冻融3次的稳定性。质控样品的RE在±15%之间，RSD<15%，表明分析物在上述条件下稳定。
1.5 大鼠体内药代动力学研究
1.5.1 索拉非尼对艾托格列净药动学影响实验
12只健康雄性SD大鼠，随机分为A、B两组，每组6只。索拉非尼以含5% DMSO的0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液混悬，艾托格列净用0.5% CMC-Na溶液配制。A组和B组大鼠连续7天分别灌胃索拉非尼对照溶剂和索拉非尼（100 mg/kg），在第7天常规给药1 min后均予艾托格列净（1.5 mg/kg）灌胃。分别在给药前及给药后5、10、20、30、45 min和1、1.5、2、3、5、7、10、12、24、48 h于大鼠眼内眦静脉丛取血约100 μL，置于肝素化离心管后3 500 r/min离心10 min，取上清液保存至-80 ℃冰箱中待测。
1.5.2 多纳非尼对艾托格列净药动学影响实验
12只健康雄性SD大鼠，随机分为C、D两组，每组6只。多纳非尼片用0.5%羟丙基甲基纤维素（HPMC）和纯净水以4∶1比例溶解配制。C组和D组大鼠连续7天分别灌胃多纳非尼对照溶剂和多纳非尼（40 mg/kg），第7天给药后1 min灌胃艾托格列净（1.5 mg/kg），其余处理同“1.5.1”。
1.6 统计学方法
应用DAS 2.1.1软件非房室模型计算药代动力学参数，采用GraphPad Prism 8.0软件绘制药-时曲线。采用SPSS 25.0软件进行统计分析，符合正态分布的计量资料以
2. 结果
2.1 方法学验证
2.1.1 专属性
大鼠空白血浆、艾托格列净质量浓度为5 ng/mL的模拟血浆样品、大鼠灌胃艾托格列净（1.5 mg/kg） 1 h的血浆样品的典型色谱图见图2。结果显示，艾托格列净及内标的保留时间分别为1.06、1.02 min，空白血浆中内源性物质不干扰艾托格列净及内标的测定，方法专属性良好。
注： Ⅰ，空白血浆；Ⅱ，加入5 ng/mL艾托格列净和内标的空白血浆；Ⅲ，大鼠给药后血浆样品。图 2 血浆中艾托格列净和内标达格列净的色谱图Figure 2. Typical chromatogram of ertugliflozin in plasma and internal standard dapagliflozin2.1.2 标准曲线与定量下限
艾托格列净在5～2 000 ng/mL范围内线性关系良好，典型回归方程为Y=0.003 21X+0.005 4（r=0.998 6），定量下限为5 ng/mL。标准曲线上所有浓度点的精密度均小于15%，准确度在85%～115%。
2.1.3 精密度与准确度
艾托格列净日内、日间RSD均不超过7.15%，RE为-3.78%～2.47%，详见表1。RSD与RE均满足生物样品定量分析要求，表明本方法重现性良好。
表 1 大鼠血浆中艾托格列净的精密度和准确度Table 1. Precision and accuracy of ertugliflozin in rat plasma理论质量浓度 日内（n=6） 日间（n=6） 实测质量浓度（ng/mL） RSD（%） RE（%） 实测质量浓度（ng/mL） RSD（%） RE（%） 5 ng/mL 5.12±0.09 1.68 2.47 5.04±0.24 4.82 0.82 15 ng/mL 14.43±0.18 1.21 -3.78 14.83±1.06 7.15 -1.15 800 ng/mL 809.50±17.81 2.20 1.19 802.50±42.67 5.32 0.31 1 500 ng/mL 1 508.33±70.83 4.70 0.56 1 524.44±64.46 4.23 1.63 2.1.4 基质效应与提取回收率
艾托格列净3个质控浓度样品的基质效应为103.42%～108.06%，RSD不超过5.05%，表明基质不干扰艾托格列净的测定。提取回收率为91.09%～94.62%，符合定量分析方法要求，结果见表2。
表 2 大鼠血浆中艾托格列净的基质效应和提取回收率Table 2. Matrix effect and extraction recovery of ertugliflozin in rat plasma理论质量浓度 基质效应（%） RSD（%） 提取回收率（%） RSD（%） 15 ng/mL 105.44±5.32 5.05 91.09±6.07 6.67 800 ng/mL 108.06±2.98 2.75 94.35±5.75 6.09 1 500 ng/mL 103.42±3.64 3.52 94.62±3.52 3.72 2.1.5 稳定性
大鼠血浆中艾托格列净在不同处理和储存条件下的稳定性结果见表3。结果显示，各样品在室温下放置8 h，在自动进样器中放置12 h，在-80 ℃保存1个月以及反复冻融3次（-80 ℃至室温）的稳定性均未受到影响，RSD不超过4.32%，稳定性良好。
表 3 大鼠血浆中艾托格列净的稳定性Table 3. Stability of ertugliflozin in rat plasma考察条件 理论质量浓度（ng/mL） 实际质量浓度（ng/mL） RSD（%） RE（%） 室温放置8 h 15 13.97±0.56 4.00 -6.89 800 761.50±26.91 3.53 -4.81 1 500 1 531.67±39.20 2.56 2.11 进样器放置12 h 15 15.73±0.34 2.15 4.89 800 810.33±28.70 3.54 1.29 1 500 1 558.33±21.37 1.37 3.89 -80 ℃冻存1个月 15 14.98±0.62 4.12 -0.11 800 809.17±25.36 3.14 1.15 1 500 1 543.33±65.01 4.21 2.89 -80 ℃冻融3次 15 15.37±0.65 4.21 2.44 800 814.17±35.13 4.32 1.78 1 500 1 615.00±10.49 0.65 7.67 2.2 大鼠体内药动学结果
大鼠血浆中艾托格列净的平均血药浓度-时间曲线见图3，A、B组大鼠体内艾托格列净的主要药动学参数见表4，C、D组大鼠体内艾托格列净的主要药动学参数见表5。结果显示，与A组相比，B组艾托格列净的AUC0-t 、AUC0-∞均显著增加（P值均<0.05），t1/2、MRT0-t 、MRT0-∞均显著延长（P值均<0.05），CLZ/F显著降低（P<0.05）。与C组相比，D组艾托格列净的AUC0-t 、AUC0-∞均显著增加（P值均<0.01），Tmax、t1/2、MRT0-t 、MRT0-∞均显著延长（P值均<0.01），CLZ/F、VZ/F均显著降低（P值均<0.05）。
注： a，索拉非尼对艾托格列净药代动力学的影响；b，多纳非尼对艾托格列净药代动力学的影响。图 3 大鼠血浆中艾托格列净的平均药-时曲线Figure 3. Plasma concentration-time curves of ertugliflozin in rats表 4 A、B组大鼠体内艾托格列净药代动力学参数Table 4. Pharmacokinetic parameters of ertugliflozin in rats of group A and B参数 A组（n=6） B组（n=6） 统计值 P值 AUC0-t （μg/L·h） 5 582.90（3 797.77～5 977.69） 8 663.44（7 501.49～9 770.85） Z=-2.242 0.025 AUC0-∞（μg/L·h） 5 593.76（3 808.07～5 989.96） 8 739.88（7 612.66～9 955.02） Z=-2.242 0.025 Cmax（ng/mL） 384.17±80.01 448.83±115.35 t=-1.128 0.286 Tmax（h） 1.75±0.69 5.42±3.83 t=-2.310 0.066 t1/2（h） 4.96（4.77～5.81） 7.49（6.52～10.01） Z=-2.242 0.025 CLZ/F（L·h-1·kg-1） 0.27（0.25～0.40） 0.17（0.15～0.21） Z=-2.246 0.025 VZ/F（L/kg） 1.99（1.75～3.24） 1.75（1.59～2.86） Z=-1.121 0.262 MRT0-t （h） 9.62±2.18 13.01±2.16 t=-2.704 0.022 MRT0-∞（h） 9.76±2.18 14.12±2.34 t=-3.339 0.008 注：AUC，药-时曲线下面积；Cmax，最大血药浓度；Tmax，达峰时间；t1/2，半衰期；CLZ/F，清除率；VZ/F，表观分布容积；MRT，平均滞留时间。
表 5 C、D组大鼠体内艾托格列净药代动力学参数Table 5. Pharmacokinetic parameters of ertugliflozin in rats of group C and D参数 C组（n=6） D组（n=6） 统计值 P值 AUC0-t （μg/L·h） 2 992.56±889.47 9 388.57±2 830.96 t=-5.280 0.002 AUC0-∞（μg/L·h） 2 992.61±889.50 9 449.61±2 855.28 t=-5.289 0.002 Cmax（ng/mL） 478.50（419.50～600.25） 539.50（512.50～678.00） Z=-1.441 0.150 Tmax（h） 0.75±0.22 4.83±2.04 t=-4.871 0.004 t1/2（h） 2.96±0.22 6.18±0.47 t=-15.224 <0.001 CLZ/F（L·h-1·kg-1） 0.54±0.16 0.17±0.05 t=5.510 0.002 VZ/F（L/kg） 2.31±0.73 1.50±0.35 t=2.454 0.043 MRT0-t （h） 5.48±1.16 10.79±0.98 t=-8.552 <0.001 MRT0-∞（h） 5.48±1.16 11.07±1.09 t=-8.626 <0.001 3. 讨论
艾托格列净具有生物利用度高（100%）、对SGLT2选择性高、半衰期长（约16.6 h）等特点，同时能够独立于降糖作用外使心血管获益和减重，因此在T2DM合并心血管疾病、T2DM伴肥胖患者中有较大优势［17-18］。因T2DM患者常存在共病，艾托格列净与其他药物联用现象十分普遍，如合用药物影响其代谢酶及转运体，药物发生相互作用的风险也会增加。老年T2DM患者中，分别有14%和6%患者罹患晚期肝纤维化和肝硬化，T2DM是肝癌的显著危险因素之一［5］。临床上索拉非尼、多纳非尼均为晚期肝癌患者的一线治疗药物选择，其与艾托格列净联合使用的情况也十分常见。本研究在大鼠体内，分别考察了多次给予索拉非尼和多次给予多纳非尼对单次给予艾托格列净的药代动力学相互作用，结果发现索拉非尼使艾托格列净的AUC0-t 和AUC0-∞分别增加64.7%和67.2%，多纳非尼使艾托格列净的AUC0-t 和AUC0-∞分别增加213.7%和215.8%。此外B、D两实验组中，艾托格列净的t1/2较对照组均显著延长，而CLZ/F显著下降，提示联合索拉非尼或多纳非尼均显著抑制大鼠体内艾托格列净的代谢过程，从而增加其暴露量。艾托格列净的降糖疗效与体内暴露量呈正相关，尿糖排泄量具有剂量依赖性［19］，同时艾托格列净暴露的增加可能导致泌尿系感染、酮症酸中毒、低血糖等药物不良反应风险增加。因此，临床上索拉非尼或多纳非尼与艾托格列净联用时，需给予高度重视，及时评估疗效及不良反应，必要时减少艾托格列净给药剂量甚至更换降糖药物，避免影响药物治疗结局。
本研究以大鼠为实验对象开展研究，尽管人与啮齿动物的UGT酶活性及表达水平存在差异，但两种属间UGT代谢酶家族具有较高的同源性和相似性［20］。大鼠体内UGT1A9为非功能性表达代谢酶，由UGT1A7代偿发挥UGT1A9的作用［21-22］。有研究显示，索拉非尼能够显著抑制大鼠体内UGT1A7（对应人类UGT1A9）的表达，从而抑制底物他喷他多、达格列净等药物的葡萄糖醛酸化，增加底物体内暴露量［10，23］。艾托格列净主要经肝脏UGT1A9和UGT2B7代谢为无药理活性的葡糖苷酸，研究报道，UGT1A9诱导剂利福平和UGT1A9抑制剂酮康唑均能显著影响艾托格列净的体内药代动力学过程［24-25］。同样，本研究推测索拉非尼主要抑制了大鼠体内艾托格列净经UGT1A7（对应人类UGT1A9）的葡萄糖醛酸化代谢途径，导致其清除率降低。此外，索拉非尼被证实是P-gp的体外抑制剂［12］，其也可能参与了艾托格列净经P-gp的转运过程，从而影响其暴露量。本研究显示，多纳非尼对艾托格列净的影响较索拉非尼更为显著，这可能是由于氘代策略使多纳非尼对UGT1A9的抑制强度发生改变，另外多纳非尼和艾托格列净竞争性结合UGT1A9的能力与索拉非尼也存在差异，具体机制尚需进一步研究。
综上，本研究表明索拉非尼和多纳非尼均能影响艾托格列净在大鼠体内的药代动力学过程，增加其体内暴露量，临床联合用药时应密切监测疗效及不良反应，对临床用药有一定参考价值。本研究不足之处在于以健康大鼠为实验对象，未纳入肝癌和T2DM动物模型，没有考虑疾病状态对体内药代动力学过程的影响，上述问题可在今后更深入的研究中进一步探讨。
-
图 1 各组小鼠肝组织病理形态学变化（HE染色，×100）
Figure 1. Pathological changes of liver tissue in mice of each group（HE staining，×100）
图 3 各组小鼠肝组织NAMPT、Sirt1、AMPKα、SREBP1蛋白表达
Figure 3. The hepatic protein expression of NAMPT、Sirt1、AMPKα、SREBP1 in mice of each group
图 4 红景天苷对NAFLD小鼠肝脏NAMPT、Sirt1、AMPKα、SREBP1表达的影响
Figure 4. The effect of salidroside on the hepatic protein expression of NAMPT、Sirt1、AMPKα、SREBP1 in mice of each group
表 1 NAS评分标准
Table 1. NAS scoring criteria for liver tissue
组织学标志 评分（分） 评分标准 脂肪变性 0 <5％ 1 5％～33％ 2 33％～66％ 3 >66％ 小叶炎症 0 无 1 <2 2 2～4 3 >4 气球样变 0 无 1 很少；不明显 2 大量；显著 
下载: 导出CSV
表 2 红景天苷对KM小鼠血清生化指标的影响
Table 2. The effect of Salidroside on serum biochemical indicators in KM mice
项目 正常组 （n=6） HFD组 （n=6） HFD+空白对照组（n=6） HFD+红景天苷组（n=6） F值 P值 ALT（U/L） 60.48±11.03 83.17±9.611） 85.17±9.291） 67.21±7.202）3） 9.940 <0.001 AST（U/L） 243.78±60.49 532.7±80.551） 575.25±114.491） 403.91±80.171）2）3） 17.970 <0.001 TG（mmol/L） 1.92±0.17 3.51±0.701） 3.90±0.851） 2.64±0.772）3） 5.180 <0.010 TC（mmol/L） 0.42±0.08 0.81±0.301） 0.88±0.271） 0.70±0.161） 10.270 <0.001 HDL-C（mmol/L） 4.29±0.95 2.39±0.631） 2.64±0.661） 3.63±0.562）3） 9.050 <0.05 LDL-C（mmol/L） 0.36±0.12 0.65±0.081） 0.67±0.111） 0.45±0.122）3） 11.510 <0.001 注：与正常组比较，1）P<0.05；与HFD组比较，2）P<0.05；与HFD+空白对照比较，3）P<0.05。
下载: 导出CSV
表 3 各组小鼠肝组织NAS评分
Table 3. The NAS score of liver tissue in mice of each group
组别 动物数（只） 评分（分） 正常组 6 0.33±0.52 HFD组 6 6.17±0.981） HFD+空白对照组 6 5.5±1.051） HFD+红景天苷组 6 2.5±0.551）2）3） F值 67.07 P值 <0.001 注：与正常组比较，1）P<0.01；与HFD组比较，2）P<0.01；与HFD+空白对照组比较，3）P<0.01。
下载: 导出CSV
-
[1] FAN JG. Epidemiology of alcoholic and nonalcoholic fatty liver disease in China[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2013, 28( Suppl 1): 11- 17. DOI: 10.1111/jgh.12036. [2] LAZARUS JV, MARK HE, VILLOTA-RIVAS M, et al. The global NAFLD policy review and preparedness index: Are countries ready to address this silent public health challenge?[J]. J Hepatol, 2022, 76( 4): 771- 780. DOI: 10.1016/j.jhep.2021.10.025. [3] YOUNOSSI ZM, KOENIG AB, ABDELATIF D, et al. Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease-Meta-analytic assessment of prevalence, incidence, and outcomes[J]. Hepatology, 2016, 64( 1): 73- 84. DOI: 10.1002/hep.28431. [4] CHEN SD, ZHOU HH, ZHAO ZX, et al. Jiangzhi and Hepatoprotective effect of salidroside on nonalcoholic fatty liver disease[J]. China J Tradit Chin Med Pharm, 2013, 28( 9): 2701- 2703.陈少东, 周海虹, 赵正晓, 等. 红景天苷对非酒精性脂肪性肝炎的降脂保肝作用研究[J]. 中华中医药杂志, 2013, 28( 9): 2701- 2703. [5] YANG ZR, WANG HF, ZUO TC, et al. Salidroside alleviates oxidative stress in the liver with non- alcoholic steatohepatitis in rats[J]. BMC Pharmacol Toxicol, 2016, 17: 16. DOI: 10.1186/s40360-016-0059-8. [6] SUN P, SONG SZ, JIANG S, et al. Salidroside regulates inflammatory response in raw 264.7 macrophages via TLR4/TAK1 and ameliorates inflammation in alcohol binge drinking-induced liver injury[J]. Molecules, 2016, 21( 11): 1490. DOI: 10.3390/molecules21111490. [7] ZHANG Z, PING J, XU LM. Screening Chinese medicine components for inhibition of human hepatic stellate cell migration[J]. J Clin Hepatol, 2012, 28( 3): 183- 188, 191. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2012.03.007.张展, 平键, 徐列明. 抑制人肝星状细胞株迁移的中药组分筛选[J]. 临床肝胆病杂志, 2012, 28( 3): 183- 188, 191. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2012.03.007. [8] WANG LF, WANG XN, HUANG CC, et al. Inhibition of NAMPT aggravates high fat diet-induced hepatic steatosis in mice through regulating Sirt1/AMPKα/SREBP1 signaling pathway[J]. Lipids Health Dis, 2017, 16( 1): 82. DOI: 10.1186/s12944-017-0464-z. [9] KOBYLIAK N, ABENAVOLI L. The role of liver biopsy to assess non-alcoholic fatty liver disease[J]. Rev Recent Clin Trials, 2014, 9( 3): 159- 169. DOI: 10.2174/1574887109666141216102231. [10] ALAMEDDINE A, FAJLOUN Z, BOURREAU J, et al. The cardiovascular effects of salidroside in the Goto-Kakizaki diabetic rat model[J]. J Physiol Pharmacol, 2015, 66( 2): 249- 257. [11] WANG SY, ZHAO XX, YANG SX, et al. Salidroside alleviates high glucose-induced oxidative stress and extracellular matrix accumulation in rat glomerular mesangial cells by the TXNIP-NLRP3 inflammasome pathway[J]. Chem Biol Interact, 2017, 278: 48- 53. DOI: 10.1016/j.cbi.2017.10.012. [12] FAN XJ, WANG Y, WANG L, et al. Salidroside induces apoptosis and autophagy in human colorectal cancer cells through inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway[J]. Oncol Rep, 2016, 36( 6): 3559- 3567. DOI: 10.3892/or.2016.5138. [13] WANG MH, LUO L, YAO LL, et al. Salidroside improves glucose homeostasis in obese mice by repressing inflammation in white adipose tissues and improving leptin sensitivity in hypothalamus[J]. Sci Rep, 2016, 6: 25399. DOI: 10.1038/srep25399. [14] GUO Y, WANG SY, YI JJ, et al. Effect of salidroside on apoptosis of CD71+ nucleated red blood cells in bone marrow in high altitude polycythemia model rats[J]. J Jilin Univ(Med Ed), 2023, 49( 5): 1174- 1181. DOI: 10.13481/j.1671-587X.20230510.郭勇, 王生艳, 易静静, 等. 红景天苷对高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49( 5): 1174- 1181. DOI: 10.13481/j.1671-587X.20230510. [15] DAI N, ZOU Y, WANG HF, et al. Inhibitory effect of salidroside on liver oxidative stress in rats with non-alcoholic steatohepatitis[J]. Chin J Pathophysiol, 2013, 29( 9): 1704- 1708. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.09.030.戴宁, 邹原, 王慧芳, 等. 红景天苷对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织氧化应激的抑制作用[J]. 中国病理生理杂志, 2013, 29( 9): 1704- 1708. DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.09.030. [16] ZHANG XR. The mechanism of salidroside regulating glucose and lipid metabolism in type 2 diabetes mice through microRNA[D]. Changchun: Jilin University, 2016.张新茹. 红景天苷在2型糖尿病小鼠中通过microRNA改善糖脂代谢的机制研究[D]. 长春: 吉林大学, 2016. [17] WU TF, LIAO XH, ZHONG BH. Epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease in some regions of China[J]. J Clin Hepatol, 2020, 36( 6): 1370- 1373. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2020.06.039.吴挺丰, 廖献花, 钟碧慧. 中国部分地区非酒精性脂肪肝病的流行情况[J]. 临床肝胆病杂志, 2020, 36( 6): 1370- 1373. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2020.06.039. [18] LI YY, XIE ZY. Advances in the etiology and treatment of non-obese nonalcoholic fatty liver disease[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37( 2): 452- 457. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.02.043.李洋洋, 谢正元. 非肥胖型非酒精性脂肪性肝病的病因及治疗进展[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37( 2): 452- 457. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.02.043. [19] National Workshop on Fatty Liver and Alcoholic Liver Disease, Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association, Fatty Liver Expert Committee, Chinese Medical Doctor Association. Guidelines of prevention and treatment for nonalcoholic fatty liver disease: A 2018 update[J]. J Clin Hepatol, 2018, 34( 5): 947- 957. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2018.05.007.中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组, 中国医师协会脂肪性肝病专家委员会. 非酒精性脂肪性肝病防治指南(2018年更新版)[J]. 临床肝胆病杂志, 2018, 34( 5): 947- 957. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2018.05.007. [20] RONGVAUX A, SHEA RJ, MULKS MH, et al. Pre-B-cell colony-enhancing factor, whose expression is up-regulated in activated lymphocytes, is a nicotinamide phosphoribosyltransferase, a cytosolic enzyme involved in NAD biosynthesis[J]. Eur J Immunol, 2002, 32( 11): 3225- 3234. DOI: 3.0.CO;2-L">10.1002/1521-4141(200211)32: 11<3225: AID-IMMU3225>3.0.CO;2-L. [21] KOHJIMA M, HIGUCHI N, KATO M, et al. SREBP-1c, regulated by the insulin and AMPK signaling pathways, plays a role in nonalcoholic fatty liver disease[J]. Int J Mol Med, 2008, 21( 4): 507- 511. [22] JEON TI, OSBORNE TF. SREBPs: Metabolic integrators in physiology and metabolism[J]. Trends Endocrinol Metab, 2012, 23( 2): 65- 72. DOI: 10.1016/j.tem.2011.10.004. 期刊类型引用(1)
1. 周庆，杨旭. 甲胎蛋白、纤维蛋白原与前白蛋白比值、癌胚抗原、D-二聚体对结肠癌术后复发的预测价值. 中华消化病与影像杂志(电子版). 2024(04): 301-305 . 
百度学术其他类型引用(1)
-
下载:
百度学术
