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ISSN 2097-3497 (Online)
CN 22-1108/R

Influencing factors for abnormal renal function markers in chronic hepatitis B patients receiving long-term oral administration of entecavir/tenofovir disoproxil fumarate

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.08.011
Research funding:

National Key R&D Program of China (2018ZX10302205-004)

  • Received Date: 2020-12-24
  • Accepted Date: 2021-01-26
  • Published Date: 2021-08-20
  •   Objective  To investigate the status of abnormal renal function markers and related influencing factors in chronic hepatitis B (CHB) patients receiving oral antiviral drugs for a long time.  Methods  A retrospective analysis was performed for the clinical data of 681 CHB patients who attended Henan Provincial People's Hospital from January to December 2019 and received long-term oral administration of entecavir (ETV)/tenofovir disoproxil fumarate (TDF). All patients received the measurement of blood renal function markers (urea, creatinine, retinol-binding protein [RBP], cystatin C [Cys-C], and β2-microglobulin [β2-MG]), urinary renal function markers (α1-microglobulin [α1-MG], Cys-C, and N-acetyl-β-D-glucosaminidase [NAG]), and urine routine parameters. The incidence rate of abnormal renal function markers were analyzed. The McNemar's test was used for comparison of categorical data between groups, and the multivariate logistic regression analysis was used to investigate independent influencing factors for abnormal renal markers in urine.  Results  The 681 patients had a mean age of 39.8±11.0 years and received medication for 1.88 (0.80-3.16) years. There were 417 male patients and 264 female patients, and the incidence rate of liver cirrhosis was 27.02% (184/681). Of all 681 patients, 442 received ETV and 239 received TDF. The measurement of blood renal function markers showed that urea, creatinine, retinol-binding protein, Cys-C, and β2-MG had an abnormal rate of 6.9% (47/681), 0.15% (1/681), 0(0/681), 2.21% (15/681), and 5.03% (30/681), respectively, and the abnormal rate of urinary protein was 7.29% (49/672). The measurement of urinary renal function markers showed that α1-MG, NAG, and Cys-C had an abnormal rate of 38.62% (263/681), 37.74% (257/681), and 19.38% (132/681), respectively. The abnormal rate of urine test was higher than that of blood test (P < 0.001). The multivariate logistic regression analysis with urinary α1-MG as the dependent variable showed that sex (odds ratio [OR]=0.293, 95% confidence interval [CI]: 0.204-0.419, P < 0.05), age (OR=1.298, 95%CI: 1.108-1.521, P < 0.05), and type of nucleoside drug (OR=2.100, 95%CI: 1.431-3.083, P < 0.05) were influencing factors. The multivariate logistic regression analysis with urinary NAG as the dependent variable showed that age (OR=1.177, 95%CI: 1.008-1.375, P=0.040) was an influencing factor.  Conclusion  Compared with blood renal function markers, urinary renal function markers can identify renal injury earlier in CHB patients, and the elderly patients and the patients receiving TDF are more likely to develop abnormal renal function. However, it is not observed whether the duration of medication and liver cirrhosis can increase the risk of renal injury in CHB patients.

     

  • 全球有超过2.4亿慢性HBV感染者,若不及时进行有效、规范的治疗,15%~40%的患者会进展为肝硬化,最终导致肝衰竭和肝细胞癌(HCC)[1]。虽然乙型肝炎疫苗的接种使HBV感染的患病率逐年下降,但多数亚洲地区仍归为中至高流行区。我国HBsAg流行率为5%~6%,但因为人口基数大,所以仍存在许多的慢性HBV感染者,其中需要治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者约有2000万~3000万[2-3];因此慢性HBV感染依然是我国的重大公共卫生问题。当前用于抗病毒治疗的核苷(酸)类似物(nucleos(t)ide analogues, NAs)虽可有效抑制病毒复制,延缓疾病进展,但对肝细胞核内的共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)均无明确作用,使得病毒无法完全清除。cccDNA作为HBV复制的原始模板,检测肝内cccDNA水平是评价抗病毒疗效及停止治疗的重要指标[4-5],由于肝活检为侵入性操作,cccDNA在肝组织内分布不均,松弛环状双链DNA(relaxed circularDNA,rcDNA)的存在影响cccDNA含量等因素导致cccDNA检测难以在临床广泛开展[6-7]。因此需要寻找能反映肝内cccDNA活性且方便操作的临床替代指标。近年来HBV RNA作为新的血清学标志物被广泛提出,因为其只能来自肝内cccDNA, 所以能更好的反映HBV转录活性,本研究主要探讨血清HBV RNA在HBeAg阳性CHB患者不同时期的表达水平及检测价值。

    收集2019年8月—2020年12月在杭州市西溪医院肝病科门诊及住院部诊治的CHB患者,纳入标准:(1)诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》[8];(2)准备接受或已接受NAs抗病毒治疗。排除标准:(1)合并HAV、HCV、巨细胞病毒等其他嗜肝病毒感染;(2)合并HIV感染;(3)HCC患者;(4)代谢性肝病、自身免疫性肝病及近期使用肝损伤性药物者;(5)合并其他系统恶性肿瘤或严重疾病者;(6)研究者认为不适合入组的其他情况。

    本研究使用的HBV RNA定量检测试剂盒由湖南圣湘科技有限公司提供,检测原理通过逆转录HBV核酸中的pgRNA(经DNA酶消化),利用针对HBV pgRNA序列设计的一组特异性引物与荧光探针,配以PCR反应液,在荧光定量PCR仪上,应用一步法RT实时荧光定量PCR检测技术,通过荧光信号的变化实现HBV pgRNA的定量检测,HBV RNA检测下限为50拷贝/mL。应用化学发光免疫分析法在美国雅培Alinity i全自动化学发光免疫分析仪上行HBV血清学标志物检测;用HBV DNA定量检测试剂盒,在ABI7500荧光定量PCR仪上行HBV DNA检测;HBV DNA检测下限为30 IU/mL;用Beckman Coulter AU5831全自动生化分析仪检测ALT(正常范围9~50 U/L)、AST(正常范围15~40 U/L)。

    本研究经杭州市西溪医院伦理委员会批准, 批号:2019年(科)伦审第21号,所有患者均签署知情同意书。

    采用SPSS 25.0进行统计学处理,正态分布的计量资料用x ±s表示,2组间比较采用独立样本t检验;非正态分布的计量资料用M(P25~P75)表示,2组间比较采用Mann-Whitney U检验;计数资料组间比较采用χ2检验;采用Pearson或Spearman相关分析描述两变量间的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

    本研究共纳入61例CHB患者,平均年龄(39.95±9.88)岁。按HBeAg及HBV DNA状态分为3组:HBeAg阳性CHB[HBeAg(+)、HBV DNA(+)]未治患者,HBeAg血清学转换前[HBeAg(+)、HBV DNA(-)]经治患者,HBeAg血清学转换后[HBeAg(-)、HBV DNA(-)]经治患者(表 1)。

    表  1  纳入患者分组情况及基线资料
    组别 例数 年龄(岁)
    HBeAg(+)、HBV DNA(+) 22 13 9 35.36±7.55
    HBeAg(+)、HBV DNA(-) 17 11 6 39.35±7.98
    HBeAg(-)、HBV DNA(-) 22 13 9 45.00±11.16
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    HBeAg阳性CHB未治患者血清HBV RNA阳性率100%(22/22),HBV RNA载量最大值为9 log10拷贝/mL,平均为7 log10拷贝/mL;HBeAg血清学转换前经治患者血清HBV RNA阳性率88.2%(15/17),HBV RNA载量最大值为5 log10拷贝/mL,平均4 log10拷贝/mL;HBeAg血清学转换后经治患者血清HBV RNA阳性率22.7%(6/22),HBV RNA载量最大值为4 log10拷贝/mL。

    经治HBeAg阳性组的HBV RNA阳性率显著高于HBeAg阴性组,差异有统计学意义(P<0.001), 2组间HBV RNA、HBsAg水平比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)(表 2)。

    表  2  经治患者HBeAg阳性组与HBeAg阴性组临床资料比较
    项目 HBeAg阳性组(n=17) HBeAg阴性组(n=22) 统计值 P
    男/女(例) 11/6 13/9 0.753
    年龄(岁) 39.35±7.98 45.00±11.16 t=-1.77 0.086
    HBV RNA阳性[例(%)] 15(88.2) 6(27.3) <0.001
    HBV RNA(log10拷贝/mL) 4.05(3.01~5.18) 1.40(1.40~1.83) Z=-4.44 <0.001
    HBsAg(log10IU/mL) 3.24(2.86~3.50) 2.76(2.07~3.35) Z=-2.41 0.016
    ALT(U/L) 22.24±10.83 25.09±11.76 t=-0.78 0.442
    AST(U/L) 23.00±4.48 23.9±14.23 t=-0.65 0.521
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    CHB患者NAs治疗实现HBV DNA阴转时,肝功能复常,ALT、AST水平降低,HBV RNA、HBsAg水平也均有所降低(P值均<0.001)(表 3)。对于治疗后HBV DNA阴转的CHB患者,Spearman相关分析示,血清HBV RNA与血清HBsAg无相关性(P=0.091)。

    表  3  HBV DNA阳性组与HBV DNA阴性组临床资料比较
    项目 HBV DNA阳性组(n=22) HBV DNA阴性组(n=39) 统计值 P
    男/女(例) 13/9 24/15 χ2=0.035 0.851
    年龄(岁) 35.36±7.55 42.54±10.18 t=-2.88 0.005
    HBV RNA(log10拷贝/mL) 7.62(6.51~8.55) 1.94(1.40~4.04) Z=-6.16 <0.001
    HBsAg(log10IU/mL) 3.94(3.26~4.23) 2.90(2.61~3.44) Z=-4.07 <0.001
    ALT(U/L) 249.50(114.25~664.50) 20.00(16.00~31.00) Z=-6.45 <0.001
    AST(U/L) 106.00(63.75~418.75) 23.00(21.00~27.00) Z=-6.45 <0.001
    HBV DNA(log10IU/ml) 7.21±1.23 -
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    在HBeAg阳性CHB未治患者中,HBV RNA与HBsAg(r=0.612,P<0.01)、HBV DNA(r=0.922, P<0.01)均具有较强的相关性(图 1);在HBeAg血清学转换前和HBeAg血清学转换后的经治患者中,HBV RNA与HBsAg无相关性(P>0.05);3组患者HBV RNA与年龄、ALT、AST均无相关性(P值均>0.05)。

    图  1  HBeAg阳性CHB未治患者HBV RNA与HBsAg、HBV DNA的相关性

    CHB是导致肝硬化、肝衰竭、HCC的主要危险因素,每年约有80万人死于HBV感染相关性疾病[9],因此如何有效的管理CHB患者仍是当前临床工作的热点和难点。随着对HBV RNA的研究深入,已知HBV感染患者血清中的HBV RNA就是前基因组RNA(pgRNA),即3.5 kb mRNA;pgRNA是HBV复制的中间产物,利用cccDNA作为模板在病毒核衣壳内转录,最后释放完整的子代病毒,因此血清HBV RNA与HBsAg不同,其只能来自于肝内cccDNA;而NAs是通过取代HBV复制过程中聚合酶区的核苷来抑制病毒复制,并不能影响cccDNA转录生成mRNA,由此可以推断HBV RNA与肝内cccDNA相关,检测外周血HBV RNA水平可以反映肝内cccDNA的转录活性。因此相比于HBsAg、HBV DNA等传统的血清学指标,血清HBV RNA水平可以更好的反映肝内病毒复制水平,其能作为CHB患者管理的新型标志物[10-11]

    HBeAg阳性CHB患者在接受抗病毒药物治疗后会逐步实现HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换等目标,本研究通过观察HBeAg阳性的CHB患者不同时期的HBV RNA表达水平,发现未治疗的22例CHB患者血清中均能检测出较高的血清HBV RNA水平;39例治疗后HBV DNA阴转的CHB患者中仍有21例可以检测出HBV RNA,这表明在评估病毒复制方面HBV RNA比HBV DNA更灵敏,即使是在HBV DNA持续低于检测下限且发生HBeAg血清学转换也有部分患者血清HBV RNA阳性,意味HBeAg的消失只能表示病毒复制减弱,肝内cccDNA仍可能存在低水平的转录。

    对HBeAg阳性CHB患者而言,发生HBeAg血清学转换是比较满意的终点,是发生HBsAg阴转的基本条件。本文通过比较治疗后HBV DNA阴转的HBeAg阳性组与HBeAg阴性组,发现HBeAg阳性组HBV RNA阳性率显著高于HBeAg阴性组(88.2% vs 27.3%),两组间HBV RNA、HBsAg水平差异也具有统计学意义,因HBV RNA只能来自于肝内cccDNA, 提示HBeAg阳性CHB患者肝内cccDNA转录活性更高。因此临床上对HBeAg阳性的CHB患者要努力实现HBeAg血清学转换。

    通过分析HBV DNA阳性组与HBV DNA阴性组患者,发现接受NAs治疗后HBV DNA、HBV RNA均会发生下降,这是因为NAs类药物抑制pgRNA的逆转录,致使DNA合成受阻,而长时间接受NAs治疗使rcDNA的形成受到抑制,影响cccDNA池的回补,被感染的肝细胞数量减少,进一步导致HBV RNA的生成也减少;另外接受NAs治疗的CHB人群在病毒清除的过程中可能会促进机体免疫应答的能力从而减少cccDNA池。但是在临床上发现即使CHB患者经过长期NAs抗病毒治疗,能实现完全治愈的患者极为罕见,可能是只需要极少部分逆转录酶存在活性就能对cccDNA池进行补充,因此对大部分CHB患者而言需要长期口服NAs抗病毒治疗。

    本研究发现,未接受治疗的CHB患者HBV RNA与HBsAg(r=0.612,P<0.01)、HBV DNA(r=0.922, P<0.01)均具有较强的正相关,这种血清学间良好的相关性有助于基层医院或者医疗资源匮乏地区,使用HBsAg定量水平反映HBeAg阳性CHB患者体内病毒复制水平,而另外两组HBV DNA阴性的CHB患者HBV RNA与HBsAg无相关性,这与Mak等[12]的研究结果一致,随着治疗时间的延长,HBV RNA与HBsAg相关性逐渐下降,从一定程度反映了治疗后的HBsAg水平不能准确反映肝内cccDNA转录活性。

    综上所述,对未接受抗病毒治疗的CHB患者,血清HBV RNA与其他血清学标志物有一定的相关性,对NAs治疗后HBV DNA阴转的患者有望使用HBV RNA继续监测肝内病毒复制活性,为CHB患者长期抗病毒治疗提供依据。但本研究样本量较少,相关结论有待进一步证实,后续可以在未治疗组继续纳入合适患者并进行前瞻性队列研究,观察HBeAg阳性CHB患者在NAs治疗过程中HBV RNA的动态变化。

  • [1]
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