<正>值此辞旧迎新之际,我们谨代表《临床肝胆病杂志》第十四届编委会向一年来给予我们关心支持的编委、审稿专家、作者、读者致以诚挚的问候和良好的祝愿!岁月不居,天道酬勤。回眸2010年,《临床肝胆病杂志》秉持高水平、高层次、

<正>2010年12月10日为规范慢性乙型肝炎的预防、诊断和治疗,中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2005年组织国内有关专家制订了《慢性乙型肝炎防治指南》[1]。近

丙型肝炎病毒（HCV）感染的检测包括血清学检测和核酸检测（NAT）,前者包括HCV抗体（抗-HCV）、核心抗原检测,后者包括定性/定量RNA检测和基因型/亚型检测。抗-HCV检测是应用最广的HCV感染筛查试验,操作简便、耗时短、成本低,但其缺点是窗口期较长,不能判别是活动性感染还是病毒已被清除,不适用于免疫缺陷人群。HCV RNA是病毒感染的直接证据,既往定性RNA检测灵敏度较高,但随着实时定量PCR技术的成熟,定量检测灵敏度不断提高,线性范围不断拓宽,适用于临床抗病毒治疗应答的监测,也正逐步取代定性检测用于血液制品的筛查。近年HCV抗原检测和抗原抗体联合检测试剂盒已用于HCV感染的筛查及治疗监测,但其灵敏度尚不及NAT。目前主流的HCV基因分型试剂检测基因型有较高的符合率,而检测亚型的结果存在较大差异,需要方法学上的改进。

丙型肝炎病毒（HCV）感染是引起慢性肝病的主要原因之一,严重危害人类健康,目前抗病毒治疗的标准方案为聚乙二醇干扰素α（PEG-IFN-α）联合利巴韦林,其有效率仅为50%70%,且疫苗研究进展缓慢,已成为严峻的公共卫生问题。近10多年来,对HCV感染发病机制、保护性免疫应答和病毒持续感染机制的认识取得了很大进展,中和抗体以及CD4+和CD8+T细胞在内的强烈的T细胞免疫应答已被证明与HCV的清除相关,这将是研制丙型肝炎疫苗的希望所在。当前HCV疫苗的研究主要集中在多肽疫苗、核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组多表位疫苗、以抗原递呈细胞为载体的树突状细胞（DC）疫苗等,已有多种疫苗正在研制并进行进入临床试验前的测试。我们结合多年来对HCV的研究基础,通过与国内外同行交流,提出变"单纯预防"为"防治结合,以诱导持续免疫应答和维持病毒抑制状态为基本目标"的HCV疫苗研究新理念,发展以诱导细胞免疫为主的预防和治疗性疫苗,尤其是既能在体内有效激发HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,又能维持CD4+记忆T细胞功能的治疗性细胞疫苗。本文综述关于HCV保护性免疫应答及持续感染的...

丙型肝炎病毒（HCV）通过在宿主细胞内持续复制,导致慢性感染。目前用于治疗慢性丙型肝炎（CHC）的药物主要是聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）和利巴韦林的联合用药。本文将就HCV的细胞入侵、复制、逃避宿主的固有和获得性免疫,以及抗HCV临床试验药物的最新进展做一综述。

目前慢性丙型肝炎（CHC）的标准疗法为聚乙二醇干扰素-α（PEG-IFN-α）联合利巴韦林,但该疗法存在一定的局限性。近年来针对HCV生活周期的小分子抗病毒药物迅速发展,给将来的治疗带来了新的希望。

丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科,其基因组为单股正链RNA,易变异,慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题,目前尚无有效的疫苗。本文综述了HCV实验性疫苗的免疫学评价方法,为疫苗的研制及应用提供参考。

丙型肝炎病毒(HCV)急性感染的患者,大约30%发生自发清除,已经进展为慢性丙型肝炎(CHC)的患者,经过抗病毒治疗,大约40%得到持久的HCV清除。近年来宿主基因变异在HCV感染治疗中的关键作用备受瞩目。今就近期的国内外报道,对白细胞介素(IL)28B的基因变异与HCV感染转归的关系进行综述。

当前全世界有超过1.7亿慢性丙型肝炎(CHC)感染者,目前尚无有效的疫苗。最近丙型肝炎病毒(HCV)实验性疫苗的研制有不少进展。本文综述了增强HCV DNA疫苗免疫原性的策略及相关进展。

丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝病的主要原因。大部分HCV感染者呈持续性感染,这与肝硬化和肝细胞癌紧密相关。近十年来,许多学者通过不懈的努力建立了各种行之有效的小鼠实验模型,基于这些模型的研究极大地丰富和加深了对HCV感染、致病、免疫等方面分子机理的认识,同时也极大地促进了新的抗病毒策略和特异药物筛选的发展。本文就目前最常见和未来有应用前景的两类小鼠实验模型作一综述。

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）多细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位树突状细胞（DC）疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白（GFP）标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达。流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原（HLA）-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应。ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素（IL）-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素（IFN）-γ的含量。用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测特异性CTL的杀伤活性。结果成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达。重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为（71.19±3.29）%、（81.21±5.07）%、（91.23±4.24）%、（97.95±5.31）%。感染DC后促进同源T细胞增...

目的构建含丙型肝炎病毒（HCV）复合多表位基因的真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染细胞系。方法通过生物信息学预测分析的方法得到涵盖HCV不同基因型与小鼠H2复合体的多个细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位,串联后人工合成基因序列,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,然后利用脂质体法转染CHO细胞,通过持续G418筛选建立稳定转染细胞株。最后通过荧光显微镜观察、RT-PCR和Western Blot等方法证实多表位基因的表达。结果所构建的含有HCV复合多表位基因的真核表达载体pEGFP-mEpi在CHO细胞中能稳定表达。结论真核表达载体的成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究复合多表位疫苗的基因免疫奠定了基础。

目的探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白质5A(HCV NS5A)对Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法用含HCV NS5A基因的表达质粒pcNS5A瞬时转染QSG7701细胞,采用免疫细胞化学技术检测HCV NS5A及TLR4蛋白质的表达;采用逆转录聚合酶链反应观察HCV NS5A和TLR4的mRNA表达。结果转染pcNS5A质粒细胞内有HCV NS5A蛋白的表达。转染pcNS5A组TLR4 mRNA及蛋白质表达均较转染pRc/CMV和未转染质粒组明显增强,而后两组细胞TLR4 mRNA和蛋白质表达相似。结论 HCV NS5A可上调TLR4 mRNA和蛋白的表达。

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep和腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-Ub-Mep,通过检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒,并测定重组腺病毒滴度。结果经酶切鉴定、PCR鉴定和荧光分析,均证实得到重组的腺病毒。测定病毒滴度为1.2×1011cfu/L。结论成功包装出重组腺病毒rAd-Ub-Mep,构建了HCV HLA-A2限制性多表位基因的重组腺病毒疫苗,为进一步研究HLA-A2限制性复合多表位基因诱导的细胞免疫应答奠定了基础。

目的构建丙型肝炎病毒（HCV）反应性干扰素（IFN）-β的微型基因组及其抑制效应的初步评价。方法提取poly I:C刺激的淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增IFN-β基因,克隆入前期构建的HCV微型基因组pT7-5U△131-315rI3Urz;PCR并鉴定插入方向,将反向插入的质粒命名为pT7-5U△131-315rIFNI3Urz。将微型基因组5U△131-315rIFNI3URz克隆入pcDNA3.1载体,获得pCMV-5U△131-315rIFNI3URz。将体外转录的5U△131-315rIFNI3URz RNA转染Huh7.5BB7细胞,48 h后检测IFN-β的表达。将pCMV-5U△131-315rIFNI3URz转染Huh7.5 JFH-1细胞系,荧光实时定量PCR法测定细胞中HCV RNA。结果成功建立了Huh7.5JFH-1细胞系;含有IFN-β的微型基因组在复制子细胞和HCV感染细胞中可以特异表达IFN-β;携带IFN-β的HCV微型基因组可以降低细胞中病毒的RNA拷贝水平,具有一定的剂量依赖效应。结论反向插入IFN-β基因的HCV微型基因组进入HCV感染细胞内...

目的预测各型丙型肝炎病毒（HCV）Core区的人类白细胞抗原（HLA）-DRB1*0311及0401抗原表位。方法从NCBI数据库中检索出十条包含六种分型的HCV完整氨基酸序列,使用生物信息学工具剪切Core区氨基酸序列并对其二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数进行预测,选择可能区域预测HLA-DRB1*0311及0401的抗原表位。结果 HCV Core区二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数预测分析可认为16～28、60～74、98～120区域或为抗原表位区域。HLA-DRB1*0311预测中,HCV-1a/b、4a、6a预测评分高的区域为28～36,HCV-2a/b为63～71,HCV-3a为29～37,HCV-5a为94～102。HLA-DRB1*0401中,HCV-1a、2b、4a、6a预测评分高区域为84～92,HCV～5a为120～128,HCV-1b中120～128可以预测到表位但评分低。结论 HCV Core区HLA-Ⅱ类分子抗原表位具有型间差异。

目的应用荧光RT-PCR方法对慢性丙型肝炎（CHC）患者血清进行HCV基因型分析。方法采用荧光RT-PCR方法与测序方法比较,对118例CHC阳性患者血清进行HCV RNA分型,比较两种方法分型结果的一致性;为了考察该方法的特异性,对98例慢性乙型肝炎（CHB）患者血清进行HCV RNA分型检测。结果在118例HCV RNA阳性血清标本中,用荧光RT-PCR方法检测有HCV基因1型79例（66.9%）,2型29例（24.6%）,1/2混合型8例（6.8%）;另有2例（1.7%）HCV RNA定量为1×103IU/ml弱阳性标本未分出型。测序法分出1型81例（68.4%）,2型29例（24.6%）,1/2混合型6例（5.1%）,与荧光RT-PCR方法一致2例（1.7%）HCV RNA定量结果为1×103IU/ml的阳性标本测序法未分出型。未发现其他基因型的病例。98例CHB患者血清检测结果均为阴性。结论荧光HCV基因分型的方法具有良好的敏感性、特异性、可重复性且省时省力,可选择该方法为临床诊断服务。

目的探讨中国艾滋病病毒/丙型肝炎病毒（HIV/HCV）双重感染患者HIV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答的特征。方法观察对象为HIV/HCV双重患者、单纯HIV感染者。以HIV-1 B亚型构建的全基因组肽库作为抗原,通过酶联免疫斑点（ELISPOT）法检测HIV/AIDS患者HIV特异性CTL应答。并对HIV/HCV双重感染患者的HIV特异性CTL应答进行相关性分析。结果 HIV/HCV双重感染组和单纯HIV感染组的HIV特异性CTL应答强度与频率在肽段水平存在一定差异,与单纯HIV感染组相比,合并HCV感染组反应增强的肽段主要集中在Gag。两组特异性CTL应答强度与频率均呈明显正相关,且合并HCV感染组较单纯感染组正相关性增强。不同肽段累计反应强度的比较,Gag反应强度最高,其次是Nef。CD4计数与特异性CTL应答强度的关系无统计学意义。结论 HIV/HCV双重感染患者HCV对HIV进程的影响可能与对Gag蛋白CTL应答的增强有关。

目的制备表达丙型肝炎病毒（HCV）2a型RNA的小鼠模型,为研究HCV高亲和力中和单克隆抗体在体内的病毒清除能力提供可行的动物模型。方法采用引进的HCV 2a型的质粒Jc1,体外表达HCV RNA后转染Huh7细胞,建立可持续感染的Huh7-Jc1丙肝细胞模型。然后以该细胞腹腔注射裸鼠,或以该细胞尾静脉注射裸鼠,并通过小鼠血液中HCV 2a的RNA水平检测,观察小鼠体内的HCV存留情况,以移植未转HCV的Huh7细胞和培养上清为阴性对照。结果建立了可表达HCV RNA和核心蛋白的Huh7-Jc1细胞,且该细胞模型具有一定感染能力,以其培养上清孵育Huh7细胞,可使后者也表达HCV RNA和核心蛋白。BALB/c-nu裸鼠腹腔或尾静脉移植Huh7-Jc1细胞后,裸鼠血清中可检测到HCV RNA的表达。结论显示利用Huh7-Jc1细胞可初步制备表达HCV的丙型肝炎小鼠模型,但高效、长久表达HCV的小鼠模型还有待进一步完善。

目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒（HCV）NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统（BLI）检测肝脏稳定表达荧光素酶（Luc）报告基因的经盐酸强力霉素（Dox）诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达...

目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒（HCV）转基因小鼠模型奠定了良好的基础。

目的研究慢性丙型肝炎（CHC）与丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒（HCV/HBV）共感染者用聚乙二醇干扰素α-2a（PEG-IFNα-2a）抗病毒治疗疗效的观察。方法治疗前后定期采集31例CHC、30例HCV/HBV共感染者的外周血,检测HCV RNA、HBV DNA和肝脏纤维化指标。结果治疗后CHC患者血清中HCV RNA含量51.6%<102拷贝/ml,HCV/HBV共感染者HCV、HBV下降均不理想。结论 PEG-IFNα-2a抗病毒治疗HCV/HBV共感染者疗效较单纯丙型肝炎患者差,但对HBV、HCV有抑制作用,并部分改善机体免疫功能及肝功能。

目的探讨聚乙二醇干扰素α（PEG-IFNα）联合利巴韦林治疗复发慢性丙型肝炎（CHC）患者的应答情况及影响因素。方法 30例经IFN-α或PEG-IFNα标准RGT治疗后复发的CHC患者,均用PEG-IFNα-2a（180μg）或PEG-IFNα-2b（1.5μg/kg）联合利巴韦林（900 mg/d）再治疗,基因1型治疗48周,非基因1型治疗24周,停药随访24周,分析病毒基因型、基线HCV RNA载量、初治药物种类对联合治疗疗效的影响。结果 30例复发患者经联合再治疗后,24例（80%）获得持续病毒学应答（SVR）。18例低病毒载量（HCV RNA≤105拷贝/ml）患者中,17例（94.4%）获得SVR,与高病毒载量组（58.3%）差异有统计学意义（P=0.026）。基因1型组18例,其中14例（77.8%）获得SVR,与非基因1型组（83.3%）差异无统计学意义（P=1.000）。初治应用PEG-IFNα联合利巴韦林抗病毒的患者17例,其中13例（76.5%）经再治疗后获得SVR,与初治应用IFN-α抗病毒组（84.6%）无明显差异（P=0.672）。结论 PEG-IFNα联合...

目的观察丙型肝炎肝硬化不同条件下抗病毒治疗的临床效果,拟定丙型肝炎肝硬化的分级规范治疗标准。方法选择确诊为丙型肝炎肝硬化的患者82例,以32例慢性丙型肝炎(CHC)患者为对照,根据肝硬化程度、脾功能亢进情况以及抗病毒治疗的耐受分为不同抗病毒治疗组:在采取造血因子刺激、脾栓塞或脾切除治疗后,观察患者脾功能亢进的缓解情况,解决脾功能亢进后,以标准治疗方案为基础,采取"分级"抗病毒治疗策略,可以实施更为主动的个体化治疗方案;分析不同组别的抗病毒治疗效果,并随访患者肝功能恢复状况。结果经过治疗后,各组患者白细胞及血小板计数显著升高,在给予抗病毒治疗后,脾栓塞及脾切除治疗组均有约60%患者获得早期病毒学应答(EVR),而其持续病毒学应答(SVR)比率分别为59.3%与63.6%,丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平显著下降。结论丙型肝炎肝硬化"分级"抗病毒治疗策略,通过采取不同的抗病毒治疗方案,可以延缓病情进展,提高患者生活质量。

目的分析天津地区慢性丙型肝炎（CHC）患者血清中自身抗体阳性率及其临床意义。方法选择天津地区98例CHC患者,检测自身抗体（ANA、ASA、AMA、RF、LKM-I）阳性率,并比较自身抗体（+）及自身抗体（-）群年龄、性别及病毒复制状况。结果 CHC患者血清中自身抗体至少一种阳性的32例,阳性率32.7%。ANA阳性率最高,为26.5%;其次为RF阳性率（8.1%）,再次为AMA阳性率（2.0%）,LC-1及LKM-1阳性率为1.0%。另外,自身抗体阳性组和阴性组有关因素比较发现,阳性组年龄较大（57.1岁vs 46.8岁）,女性多见（65.6%vs 47.0%）。肝脏功能差,免疫功能异常,病毒复制活跃。结论丙型肝炎病毒（HCV）感染者存在自身免疫反应。HCV感染使感染者体内产生多种自身抗体,自身抗体检出率与年龄关系密切且与病毒的复制有关。自身抗体可能是HCV感染后肝组织损伤的重要因素。

目的探讨医院获得性急性肝脏损伤（HA-ALI）在ICU中的发病情况和易患因素,并分析影响HA-ALI患者预后的高危因素。方法对综合性ICU收治的患者入院时肝功能正常,在住院期间出现急性肝损伤（ALI）的127例重症患者临床资料进行回顾性分析。结果 ICU中HA-ALI发病率为7.83%,药物、胃肠外营养、机械通气等是常见的易患因素;死亡组患者年龄较大（P<0.01）,血清白蛋白较低（P<0.01）;心肺复苏、休克和镇静与麻醉药物的使用,为独立危险因素。结论重症患者HA-ALI发生率较高,一些治疗措施有可能引起或加重ALI,患者的年龄、肝功能状况和休克等因素对患者的预后产生较大的影响。

检索2000年至2010年期间在国内外发表的有关门冬氨酸鸟氨酸治疗显性肝性脑病(HE)和轻微型肝性脑病(MHE)的文献,并进行分析综述。结果显示,门冬氨酸鸟氨酸的治疗机制是直接降低血氨,疗效可靠,无明显不良反应,其对显性HE的疗效已得到公认,对MHE的疗效也在国内外研究中得到初步证实。

<正>为了进一步提升《临床肝胆病杂志》的学术水平,提高优秀论文刊发的时效性,特向各医学院校、医院、医学科研机构广泛征集国家、省部级自然科学基金资助项目或重点攻关项目的论文。同时为规范基金论文,特提出如下说明:

<正>《中国普外基础与临床杂志》系中华人民共和国教育部主管、四川大学华西医院主办的专业性学术期刊。涉及学科范围有:肝胆胰外科、胃肠外科、微创外科、血管外科、甲状腺外科、乳腺外科、外科营养、器官移

<正>《临床肝胆病杂志》创刊于1985年,是中华人民共和国教育部主管、吉林大学主办的国家级学术期刊,系中国生物医学核心期刊、中国科技核心期刊、中国科技论文统计源期刊,是我国首个肝胆病专业杂志。国际