发布日期：2022-05-05
乙型肝炎病毒（HBV）感染是肝硬化和肝细胞癌的主要危险因素之一。聚集的规则间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（Cas9）已被用于精确编辑HBV基因组，并通过双链断裂（DSB）的非同源末端连接修复清除HBV。然而，CRISPR/Cas9介导的DSB引发宿主基因组的不稳定性，编辑基因组的效率较低，限制了其应用。CRISPR胞苷碱基编辑器（CBE）可以通过产生提前终止密码子来沉默基因。吉林大学第一医院和明尼苏达大学开展的一项联合研究开发了一种CRISPR碱基编辑器来精确编辑HBV基因组内的单核苷酸，从而沉默HBV基因的表达。乙肝表面抗原（HBsAg）由HBV S基因编码。研究者设计了一种单导向RNA（sgRNA）来编辑HBV S基因的第30个密码子，可将其从CAG（谷氨酰胺）修改成终止密码子TAG。研究者使用携带HBV基因组的人肝癌PLC/PRF/5细胞建立了表达CBE的稳定细胞系（PLC/PRF/5-CBE）。然后用慢病毒将sgRNA导入PLC/PRF/5-CBE细胞。结果发现在表型上71%的PLC/PRF/5-CBE细胞在S基因内形成了一个提前终止密码子。HBs mRNA水平显著降低。在PLC/PRF/5-CBE细胞中观察到HBsAg分泌减少92%。经gRNA_S治疗后，细胞内HBsAg也降低了84%。此外，在HBV基因组中预测的脱靶位点中未检测到脱靶效应。序列分析证实HBV基因型B、C、F、G和H的95%、93%、93%、9%和72%的S基因序列具有sgRNA的结合位点。
综上所述，CRISPR介导的单碱基编辑是沉默HBV S基因的有效方法，具有清除HBV的治疗潜力。
摘译自ZHOU H, WANG X, STEER CJ, et al. Efficient silencing of hepatitis B virus S gene through CRISPR-mediated base editing[J]. Hepatol Commun, 2022. DOI: 10.1002/hep4.1933. [Epub ahead of print].
（吉林大学第一医院感染病与病原生物学中心肝胆胰内科 周豪 牛俊奇 报道）
